抗體是現代生物醫(yī)學研究和診斷的重要工具，尤其是單克隆抗體（簡稱單抗），因為其特異性強、重復性高，一直是科研和臨床領域的寵兒。然而，傳統(tǒng)的單抗制備方法也存在一些局限性。近年來，重組兔單克隆抗體的興起，為解決這些問題帶來了新的可能。

為什么是重組兔單克隆抗體？

重組兔單克隆抗體結合了兔免疫系統(tǒng)的獨特優(yōu)勢和現代基因工程技術，具有多方面的優(yōu)點：

圖1:天然兔、鼠、雞和人免疫球蛋白示意圖

兔單克隆抗體的開發(fā)的技術路線

目前對于兔單克隆抗體的開發(fā)一共有3大技術路線，一是傳統(tǒng)的雜交瘤技術平臺，該技術篩選的是抗體分泌型漿B細胞（Plasma B cells）； 二是噬菌體展示技術，該技術直接對B細胞進行測序和建庫，抗體序列來源可以是漿細胞也可以是記憶細胞（Memory B cells）；三是基于單B細胞直接測序或者基于B細胞體外培養(yǎng)篩選后測序技術，該技術抗體序列來源可以是漿細胞也可以是記憶細胞。

1.雜交瘤技術

小鼠雜交瘤技術依賴于B細胞與骨髓瘤伙伴的細胞融合，自1975年被發(fā)現以來，是一種傳統(tǒng)的、廣泛和最成功地用于生產小鼠單抗的方法(圖2)。該方法將免疫小鼠的淋巴細胞與BALB/c小鼠骨髓瘤細胞融合形成永生化雜交瘤細胞，然后對雜交瘤細胞進行篩選，以鑒定產生相同抗體的特定克隆(圖2)。

雜交瘤技術是一種成熟的制備鼠源性單抗的方法，并被廣泛用于生產各種應用的抗體。然而，由于缺乏合適的骨髓瘤配對，雜交瘤方法大多局限于嚙齒動物免疫。在20世紀80年代，一種用于生產治療性抗體的人類雜交瘤技術被開發(fā)出來，這種抗體可以產生天然形式的人類抗體。這種人類雜交瘤技術開發(fā)了另一種有用的方法來產生治療性抗體，而不需要額外的修改。許多研究致力于這項技術，并發(fā)現了幾個有用的人類融合伙伴細胞系?；诟玫娜诤匣锇榈陌l(fā)展和使用電融合的技術進步，提高了人雜交瘤融合的成功率，這可以在不久的將來推動治療性抗體的發(fā)展。

2.噬菌體展示技術

自20世紀90年代初，噬菌體展示技術被探索為一種新的產生單抗的方法。在這種方法中，從淋巴細胞中獲得V基因庫，并將VHS和VLS的組合克隆到絲狀噬菌體的表面并通過與其外殼蛋白的融合表達(圖2)，然后選擇在其頂端含有表達特異性單抗的噬菌體顆粒用于常規(guī)檢測，與實際上僅限于嚙齒動物的雜交瘤技術相比，噬菌體展示技術已成功地用于從任何已知免疫球蛋白基因的物種中篩選和分離單抗。2000年，Rader等人首先描述了用噬菌體展示技術篩選兔單抗的全過程，該技術成功地應用于結腸癌免疫治療靶抗原人A33抗原兔抗體的篩選和人源化，獲得的人源化抗體與人A33抗原具有較高的特異性和親和力。

目前，抗體噬菌體展示技術以其快速、簡便的抗體生成和體外控制各種選擇參數的能力，是產生用于治療目的抗體的主要技術平臺，根據我們對抗體結構、功能和序列多樣性的了解，除了從以前的抗體庫中獲得的見解外，一種新的合成抗體庫技術被開發(fā)出來，并通過將精確設計的序列插入到抗原結合位點來用于mAb的生產，這項技術是基于遺傳復制免疫球蛋白片段和使用分子生物學技術在體外使抗體副表位多樣化而完成的，設計了幾個具有多個可變重鏈和輕鏈骨架區(qū)域的合成抗體庫，并用于分離優(yōu)化的分子識別人單。

3.單B細胞開發(fā)技術

盡管雜交瘤篩選與展示技術已被應用于兔源單克隆抗體的生產，但二者均存在局限性：雜交瘤技術存在細胞融合效率低的問題，而展示技術則易導致抗體VH與VL的天然配對丟失。

為克服上述缺陷，單B細胞抗體技術近年來迅速發(fā)展（圖2C），該技術流程包括：

（1）從外周血或淋巴組織中通過隨機分選或FACS鑒定并分離特異性單B細胞；
（2）利用抗體特異性引物進行單細胞逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）；
（3）通過PCR擴增免疫球蛋白（Ig）基因并進行測序；
（4）將Ig基因克隆至表達載體；
（5）在大腸桿菌等原核系統(tǒng)或HEK 293、CHO等真核系統(tǒng)中表達抗體蛋白；
（6）通過蛋白純化及酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）評估抗體活性。

單B細胞抗體技術是高效和穩(wěn)健的，可以在短時間內從免疫兔中產生大量抗原特異性重組抗體。這種方法已用于產生一些治療性中和單克隆抗體，用于治療多種疾病，包括癌癥、自身免疫性疾病和傳染病，例如，使用單B細胞抗體技術從HIV患者中分離出幾種有價值的mAb用于臨床診斷。

圖2.概述抗原特異性單抗產生的流程圖。(A)小鼠雜交瘤方法。(B)噬菌體展示方法。(C)單一B細胞抗體技術。

斯達特重組兔單克隆抗體

重組兔單抗是一種通過基因工程技術，從兔子免疫系統(tǒng)中提取抗體基因，再在體外重組和生產的單克隆抗體。這種方法不同于傳統(tǒng)的雜交瘤技術（通常用小鼠來制備抗體），不需要依賴動物細胞直接生產抗體，而是通過精確的基因操作實現抗體的定向設計與制造。斯達特提供重組兔單克隆抗體開發(fā)服務，流程中包含了多重特異性篩選，以確保抗體的高度特異性和高親和力。

重組兔單克隆抗體的技術路線

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杭州斯達特是優(yōu)寧維旗下品牌，志在為全球生命科學行業(yè)提供優(yōu)質的抗體、蛋白、試劑盒等產品及研發(fā)服務。依托多個開發(fā)平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發(fā)平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）、一步法ELISA平臺，PTM泛修飾抗體平臺。